Общая схема молекулярного клонирования

Молекулярное клонирование можно представить в виде серии последовательных этапов. В зависимости от конкретных целей и условий исследования, возможны различные отклонения от общей схемы, однако логика постановки эксперимента остается неизменной.

Задачей молекулярного клонирования является получение генно-инженерного препарата ДНК, всегда — на основе векторной молекулы ДНК и молекулы ДНК-вставки. (Молекулярное клонирование — это как конструктор. В качестве деталей выступают векторная ДНК-молекула и молекула ДНК-вставки, которые требуется соединить определенным образом. Так же, как при сборке конструктора, полученное единое целое будет обладать новыми свойствами, которыми не обладали каждая из деталей в отдельности. Ради создания молекулы с новыми свойствами все и затевается.) Тогда работу по выполнению этой задачи можно разбить на следующие этапы:

• Получение изолированного фрагмента ДНК (молекул ДНК-вставки)
• Вставка полученного фрагмента ДНК в векторную молекулу ДНК
• Введение образовавшейся молекулы (вектора с фрагментом-вставкой) в живой организм

  Чаще всего таким организмом является бактерия E.coli, точнее, ее лабораторные штаммы. Естественной средой обитания бактерии E.coli является кишечник человека.

  Процесс, в результате которого молекулы ДНК поглощаются микроорганизмами, называется трансформацией. Предполагается, что после трансформации поглощенные молекулы ДНК стабильно существуют в клетке-реципиенте.

• Отбор генетически-модифицированных организмов (ГМО) и устранение тех организмов, которые не были успешно модифицированы

  Под ГМО подразумеваются организмы, которые поглотили ДНК-конструкт.

• Размножение ГМО
• Выделение в достаточном количестве химерной молекулы ДНК